Методы тестирования влажных салфеток для чистых помещений

С распространением пропитанных салфеток в сфере чистых помещений и медицины Карен Россингтон и Андрей Корниенко рассмотрели вопросы необходимости внедрения методов их тестирования согласно стандарту EN и рассказали о проблемах с существующими методами.
За последние несколько лет появилось много разных видов пропитанных салфеток для фармацевтики и здравоохранения. Среди преимуществ их использования: легкость в применении, низкое содержание летучих органических соединений, удобство в использовании, снижение опасных отходов. Изначально влажные салфетки были в основном пропитаны спиртом, а салфетки с дезинфицирующими свойствами не получили достаточного распространения. Сейчас же количество последних возросло, они используются как в сфере фармацевтики, так и в медицине. В связи с появлением изменений требований к дезинфекции в определенных сферах производства, например, в Соединенном Королевстве Великобритании и Северной Ирландии, а также нелицензированных устройств асептических блоков, которые подвергаются контролю на предмет наличия спор, появилось больше салфеток со спорицидным эффектом.
Как же заказчику убедиться в том, что пропитанная салфетка так же эффективно работает, как и готовое к использованию средство, ведь существуют проблемы добавления определенного количества дезинфицирующего активного ингредиента к субстрату салфетки или мопа.

Несоответствие дезинфицирующего средства и субстрата

Ранее, когда проводились работы по тестированию пропитанных салфеток, еще не существовало специальных европейских методов тестирования. Компания Contec в своей деятельности руководствовалась существующим европейским стандартом EN учета количества взвешенных частиц и частиц на поверхности элюата, извлекаемых из пропитанных салфеток в конце их срока годности, чтобы показать, что после контакта с жидкостью не было побочного эффекта. Тестированию подвергались влажные стерильные и нестерильные салфетки путем сжатия в различных направлениях в период их срока годности для извлечения как можно большего количества жидкости, а элюат тестировался согласно стандарту EN (дезинфицирующие средства): EN 1276 (эффективность против бактерий), EN 1650 (эффективность против грибов), EN 13704 (эффективность против спор). Таблица 1 показывает полученные результаты, где элюат оказался малоэффективным по сравнению с эквивалентным средством в жидком виде.
Период воздействия для подтверждения спорицидного эффекта согласно стандарту EN 13704 – 60 мин. Тем не менее, эти цифры редко встречаются на практике, во многих компаниях процесс занимает 3-15 мин. Тестирование проходило в течение 15 мин (наиболее продолжительный период воздействия для любой тестируемой продукции). Как показывают результаты, многие салфетки не соответствовали по эффективности готовым к использованию средствам в жидкой форме. Тестирование проходило дважды во избежание возможных ошибок (все тесты прошли валидацию).
Был сделан вывод о том, что салфетки не выдержали испытаний по ряду причин. Перекись водорода при соприкосновении с некоторыми материалами начинает разлагаться; она расщепляется на воду и кислород, что приводит к тому, что салфетка теряет свои свойства, а в упаковке скапливается воздух (кислород). Повторные тесты показали, что в двухкомпонентных салфетках и салфетках с четырьмя компонентами на основе аммония активные ингредиенты настолько плотно связаны, что это мешает им оставаться на поверхности.

  Таблица 1

Информация о салфетке			Эффективность экстракта
Активный ингредиент	Субстрат	Период воздействия, мес.	EN1276	EN1650	EN13704
Амфотерное поверхностно-активное вещество	Полиэстер/целлюлоза	15	Нет	Нет	-
Амфотерный/бигуанид	Полиэстер/целлюлоза	18	Нет	Нет	-
Четырехкомпонентный/бигуанид	Полиэстер/целлюлоза	8	Да	Нет	-
Четырехкомпонентный /бигуанид	Полиэстер/целлюлоза	3	Да	Нет	-
Четырехкомпонентный/диоксид хлора	Полиэстер/целлюлоза	10	Да	Да	Нет за 15 мин.
Перекись водорода	Полиэстер/целлюлоза	8	Да	Нет	Нет
Перекись водорода	Полиэстер	20	Да	Нет	Нет
Перекись водорода	Вискозное волокно	3	Да	Да	-
Гипохлорит	Полиэстер	7	Да	Да	Да
Гипохлорит	Вискозное волокно	9	Да	Да	Нет за 15 мин.
Изопропанол	Полиэстер/целлюлоза	14	Да	Да	-
Изопропанол	Полипропилен	4	Да	Да	-
Этиловый спирт	Полиэстер/целлюлоза	11	Да	Да	-
Этиловый спирт	Полипропилен	13	Да	Да	-

Специфические тесты

Очевидно, что в связи с распространением пропитанных салфеток возникла необходимость в введении стандартов EN для тестирования салфеток. Существующие методы тестирования дезинфицирующих средств, проводимых для элюата, помимо тех, которые описаны выше, не совсем подходят для салфеток. Самый подходящий тест для учета количества бактерий и грибов на поверхности BS EN 13697:2015 не предусматривает каких-либо механических воздействий. Существует две международные нормы тестирования для пропитанных салфеток. ASTN E2362- стандартная методика оценки влажных и пропитанных салфеток на предмет дезинфекции твердых поверхностей, тест, в котором загрязненная поверхность протирается влажными салфетками, и который проводится для того, чтобы доказать обоснованность претензий Управления по охране окружающей среды (EPA). Для этого берутся от 10 до 60 загрязненных участков поверхности и проводится дезинфекция с помощью салфеток. После инкубации записываются данные с тех пробирок, в которых наблюдался рост микроорганизмов. Для прохождения теста необходимо, чтобы на 59 из 60 участков поверхности, которые подвергались дезинфекции с помощью влажных салфеток, не было видимого роста микроорганизмов, либо 10 из 10 участков были полностью продезинфицированы.
Данный метод тестирования, тем не менее, содержит недостатки. Вместе с тестами дезинфицирующих средств в виде спреев в соответствии с АОАС (Ассоциация химиков-аналитиков, состоящих на государственной службе США) их данные разнятся: некоторые параметры не стандартизированы, такие, например, как влажность во время сушки, концентрация бактерий на тестируемой поверхности.
Во время тестирования механические действия приближены к реальным условиям эксплуатации, когда поверхность протирается одной салфеткой до полного израсходования дезинфектанта, что не повторяет реальный процесс очистки в условиях чистых помещений. Более того, тест не учитывает разницу в силе нажатия и технике протирания.
Не так давно для влажных салфеток был предложен тест ASTM E2967-15-Стандартный метод тестирования для определения эффективности салфеток против бактерий на твердых непористых поверхностях с использованием специальных щеток. С его помощью была предпринята попытка нивелировать вышеуказанную разницу, используя повторяющиеся механические действия.
Этот тест был разработан научно-исследовательским институтом Filtaflex, Канада и Исследовательским центром по микробиологии окружающей среды университета Оттавы, Канада, который должен был обеспечить постоянство результатов по сравнению с методами ручного тестирования благодаря тщательному контролю силы нажатия, скорости и продолжительности протирания. Во время теста салфетка движется по окружности диаметром 10 мм со скоростью 1 оборот/сек. под углом 6°. Протирание продолжается от 5 до 45 сек. с силой надавливания, равной 150 г, которая в обычной жизни соответствует силе 800 г (разрешенная сила надавливания до 300 г). До сих пор точно неизвестно, повторяет ли вышеуказанный метод силу и технику протирания.
Результаты исследований, опубликованные в журнале «Внутрибольничные инфекции», продемонстрировали эффективность дезинфицирующего средства и чистящих салфеток. Работы проводились тремя независимыми лабораториями с использованием 5-ти видов пропитанных салфеток, доступных на рынке. Все 5 салфеток (4 чистящие и 1 дезинфицирующая) продемонстрировали показатели больше, чем log 4 (по бактериям), но только салфетка с дезинфицирующим эффектом предотвратила перекрестную контаминацию. Ученые пришли к выводу, что этот стандартный метод тестирования обеспечил большую точность и повторяемость по сравнению с тестированием влажных салфеток механическим способом. Тем не менее, он не так распространен в Европе для тестирования влажных салфеток в условиях чистых помещений.
EN16615:2015
До недавних пор не существовало EN стандарта для определения эффективности использования салфеток с дезинфицирующими свойствами, пока в 2015 г. не разработали стандарт EN16615 - испытание бацилоносителя для определения эффективности борьбы против бактерий и дрожжей. Он был специально создан для влажных салфеток, пропитанных химическим средством непосредственно на месте использования. Существуют варианты, когда добавляют некую субстанцию для имитации чистых и грязных условий использования. Время воздействия варьируется от 1 до 60 мин. Берется гранитный брусок весом 2,3-2,5 кг, он сворачивается в салфетку для стандартизации процедуры протирания и имитации средней силы надавливания при протирании. Берутся 4 участка поверхности из поливинилхлорида. Микроорганизмы высаживают на участке 1, а на оставшихся участках брусок однократно перемещают туда-обратно в течение 2 сек. При этом на участке 1 показатели должны быть меньше log 5 по бактериям или меньше log 4 по дрожжам. На участках 2-4 число образующих колонии бактерий в 1 мл среды - не более 50 КОЕ по каждому виду микроорганизмов.
На данный момент появилось больше информации об этом методе в связи с тем, что он уже прошел валидацию в некоторых лабораториях Великобритании. Целью его внедрения была имитация применения салфеток в реальных условиях, а именно: время воздействия, температура, добавление субстанций, предварительная сушка заданных микроорганизмов на тестируемой поверхности и очистка продукта с помощью салфетки. Лаборатория, которая первой стала заниматься этим методом тестирования, обозначила ключевые характеристики салфеток, повлиявшие на эффективность очистки: материал, его качество, уровень пропитки, техника протирания и сила нажатия. Главной целью стало нивелирование различий между видами салфеток.
Производители дезинфицирующих средств надеялись, что этот метод тестирования продемонстрирует отсутствие перекрестной контаминации при использовании салфеток с дезинфицирующим эффектом и послужит доказательством соответствия субстрата салфетки и активного вещества. Это стало главной целью и при проведении предыдущего теста.

Возможные недостатки

Изначально результаты тестирования оказались неожиданными, что привело к необходимости более детальных исследований, в которых приняли участие лаборатории MGS, Gosport, Великобритания.
При отправке продукции на тестирование согласно этому методу необходимо учитывать следующее:
1. Если производитель не уточнит тип пропитанной салфетки, будет использована стандартная салфетка для индустриальной промышленности, которая отличается от салфетки для чистых помещений. Стандартом предусмотрена салфетка, состоящая на 55% из целлюлозной массы и 45% из ПЭТ.
2. Если вы не укажете иного, то гранитный блок будет завернут в однослойную салфетку, даже если в своем чистом помещении вы используете другую салфетку
3. Стандартом предусмотрено, что независимо от размера и субстрата салфетки, она будет пропитана жидкостью объемом 16 мл. Это может сильно сказаться на результатах тестирования. Изначально некоторые ошибки в лабораторных тестах произошли из-за того, что салфетка выделяла недостаточное количество жидкости, либо была пропитана недостаточным ее количеством, или не могла выделять активное вещество.
Многие так называемые влажные салфетки будут оставлять лишь небольшое количество жидкости на поверхности, в то время как специальные пропитанные салфетки для удаления частиц насыщены так, чтобы разрушить связующий слой жидкости между частицами и поверхностью, не выделяя частицы обратно. Их необходимо пропитать, чтобы жидкость не стекала и одновременно оставляла видимую пленку дезинфицирующего средства на требуемое время воздействия.
Субстрат также влияет на поглощение и удержание жидкости на поверхности. Натуральные материалы, такие как хлопок и целлюлоза способны абсорбировать жидкость в само волокно, легко поглощающее жидкость, тогда как искусственные материалы, например, полиэстер удерживают жидкость между волокнами. В целом синтетические салфетки, изготовленные из полиэстера или полипропилена, обладают лучшими абсорбирующими свойствами из-за более короткой длины волокон по сравнению с салфетками из микрофибры. Искусственные материалы, такие как полипропилен, идеально подходят для использования этих растворов.
Тем не менее, тест не учитывает, сколько жидкости выделяет салфетка на поверхность. Эту проблему можно решить путем взвешивания пропитанной салфетки до и после проведения теста.
4. Техника отбора проб свабами не описывается в деталях и не прошла валидацию. В стандарте только указано, что каждый участок тестируемой поверхности должен быть обработан двумя свабами: одними сухими, вторыми влажными, затем снова сухими до тех пор, пока поверхность не высохнет. Процедура в целом занимает не более 1 мин. Каждая лаборатория по-своему применяет эту технику. Для улучшения этого процесса необходимо пользоваться контактными пластинами.

Влияние механических действий

Компания Contec, производитель салфеток, выразила сомнения по поводу возможности получения определенного ответа в результате тестирования пропитанных дезинфицирующих салфеток т.к. их внутренние испытания показали значительное уменьшение log по жизнеспособным организмам при помощи механических усилий во время протирания салфетками и мопами.
Это особенно актуально в отношении салфеток из микрофибры, которые идеально подходят для удаления микроскопических частиц. Компания была настолько уверена в эффективности механических усилий, что вместо повторения тестирования дезинфицирующих салфеток согласно EN 16615, она решила рассмотреть, какие результаты будут достигнуты, если взять три вида субстрата и смешать их с чистой с водой.
Таким образом взяли три субстрата, используемых для чистокомнатных салфеток, и салфетки, используемые в чистых помещениях различных классов со следующими параметрами: 68 г/см2 полиэстер/целлюлоза, 140 г/см2 тканый полиэстер и 120 г/см2 салфетка из 100% микрофибры. Т.к. все они различаются по размеру и весу, то и насыщены они были разным количеством воды: 12, 15 и 60 мл соответственно.
Затем салфетки были протестированы согласно EN16615 по Aspergillus brasiliensis. В таблице 2 приведены результаты тестирования. Два субстрата прошли испытания против Candida albicans, а один также прошел Aspergillus brasiliensis.
Таблица 2

№ образца	Тип салфетки	Вес, г	Снижение веса после протирания	Время высыхания поверхности (мин.)	Организм	Валидность тестирования		Снижение уровня log
26038 (Салфетка№1)	55% целлюлоза/45% полиэстер 68 г/см2	14,8	0,8	7,05	E.hirae	Да	272	<3,45
		15,0	0,9	4,29	B.subtilis	Да	148	2,97
		15,5	0,8	2,50	C.albicans	Да	<6	4,87
		14,8	0,7	4,22	A.brasiliensis	Да	15	5,25
		14,9	0,8	5,29	P.aeruginasa	Да	268	3,54
		14,8	0,8	7,29	S.aureus	Нет	>1203	<3,58

№ образца	Тип салфетки	Вес, г	Снижение веса после протирания	Время высыхания поверхности (мин.)	Организм	Валидность тестирования		Снижение уровня log
26039 (Салфетка№2)	100% полиэстер 140 г/см2	21,2	1,6	7,44	E.hirae	Да	>1650	<3,47
		21,5	1,9	7,10	B.subtilis	Да	>1650	2,24
		21,1	1,6	4,33	C.albicans	Да	>1650	2,62
		21,3	1,9	2,26	A.brasiliensis	Да	421	3,63
		20,9	1,2	6,32	P.aeruginasa	Да	1050	3,78
		21,6	2,0	6,50	S.aureus	Нет	>1650	<3,56

№ образца	Тип салфетки	Вес, г	Снижение веса после протирания	Время высыхания поверхности (мин.)	Организм	Валидность тестирования		Снижение уровня log
26040 (Салфетка№3)	100% полиэстер микрофибра 120 г/см2	97,9	2,2	5,48	E.hirae	Да	793	<3,45
		95,1	0,5	5,57	B.subtilis	Да	194	3,08
		96,5	2,0	5,50	C.albicans	Да	16	4,64
		96,7	1,6	3,02	A.brasiliensis	Да	60	4,22
		96,2	1,5	4,11	P.aeruginasa	Да	558	3,63
		96,2	1,7	7,21	S.aureus	Нет	>1650	<3,69

Если этот метод тестирования выявляет совместимость салфетки и дезинфицирующего средства, то все результаты теста должны были стать ошибочными, т.к. на салфетке не наблюдалось микробиологической активности (не было микроорганизмов). Интересно, что салфетка из полиэстера/целлюлозы прошла тест с одним из наиболее устойчивых микроорганизмов, в том числе с дрожжами, которые были на салфетке из полиэстера и полиэстера/целлюлозы. Это еще раз подтверждает важность механических действий в процессе протирания и способности различных субстратов собирать и удерживать частицы/микроорганизмы.
Если бы были собраны те же данные, как в табл. 2 – результаты можно было поставить под сомнение, сделать вывод о неэффективности дезинфицирующего средства и о влиянии механического действия в достижении этих показателей. Если бы тест проводился только на дрожжах или грибах, чтобы доказать эффективность салфетки в борьбе с этими микроорганизмами (может быть, из-за незначительной ошибки, достигнутой при проведении теста на поверхности EN 13697), это бы исказило показатели эффективности дезинфицирующего средства.
Ведутся споры по поводу возможности теста валидировать этот процесс, а также эффективности жидкости убивать частицы, а субстрата – их собирать и удерживать. Тем не менее, не совсем правильно утверждать, что тест подтверждает совместимость салфетки и дезинфицирующего средства, т.к. механические действия могут нивелировать любые потенциальные несоответствия.
Кроме того тест не показывает, будет ли салфетка, которая неэффективна в борьбе с микробами, в определенный момент выделять частицы. Следует обратить особое внимание на то, чтобы салфетки использовали только определенное количество времени, а затем выбрасывали в мусоросборники. Существует вероятность выделения микроорганизмов, например, в момент, когда салфетки будут разворачивать, а затем снова складывать.
Самый легкий способ оценить влияние механических действий - это проверить салфетки после проведения тестов на предмет контаминации микробами.
Тест является только одной из составляющих тестирования. Валидация дезинфицирующего средства должна включать следующие этапы: тестирование на поверхности без участия механических действий (EN 13697) тестирование согласно EN 16615 с использованием салфеток для чистых помещений, а в случае отсутствия опубликованных результатов тестов 3 фазы - непрерывный мониторинг окружающей среды.
Пропитанная салфетка должна пройти испытания EN 16615 c тщательным наблюдением на предмет уничтожения микробной контаминации либо вместе с тестом дезинфицирующего средства, оставшегося на салфетке и затем протестированного по EN 13697. Это подтвердит высокое качество используемого раствора и увеличит коэффициент полезного действия в результате эффективного применения.
В заключении хотелось бы отметить, что с распространением влажных салфеток в чистых помещениях и появлением новых руководств, требующих использование влажных спорицидных салфеток, необходим надежный метод тестирования EN. Тем не менее, из-за большого уменьшения количества log, которое может быть достигнуто с помощью использования только влажной салфетки, необходимо улучшать методы тестирования и уделять особое внимание их результатам.